Эритроцитометрия

(измерение-диаметра эритроцитов)


Унифицированный микроскопический метод с помощью окуляр-микрометра (1972).


Принцип.

Измерение диаметра эритроцитов в окрашенном мазке крови с помощью окуляр-микрометра


Специальное оборудование.

1. Микроскоп.

2. Окуляр-микрометр — окуляр, насаживаемый на тубус микроскопа, с круглой стеклянной пластинкой и нанесенной на ней шкалой, разделенной на 50 делений.

3. Объект-микрометр предметное стекло со шкалой длиной 2 мм, разделенной на 200 делений (каждое деление 10 мкм).


Ход определения.

Перед началом работы определяют цену одного деления шкалы окуляр-микрометра,, которая зависит от длины тубуса микроскопа и увеличения объектива. Определение проводят с помощью объект-микрометра, который устанавливают на столик микроскопа таким образом, чтобы шкалы окуляр-микрометра и объект-микрометра сбвпалн. Затем отсчитывают число делений шкалы окуляр-мик-

рометра, совпадающих с тем или иным количеством делении шкалы объект-микрометра, и определяют цену одного деления. Например: 40 делений шкалы окуляр-микрометра совпади с б делениями объектмикрометра, т. е. соответствуют 60 мкм; одно деление 60/40= 1,5 мкм. Эго определение проводят один раз для определенного микроскопа, с помощью которого в дальнейшем производят эритроцитометрию.


На сухой окрашенный мазок наносят каплю иммерсионного масла, погружают в нее иммерсионный объектив и микроскопируют с максимально освещенным полем зрения.


В тонком месте мазка (где эритроциты расположены изолированно) измеряют, диаметр не менее 100 эритроцитов, отмечая, какое количество делений шкалы окуляр-микрометра укладывается в эритроцит. Отмечают результат измерения каждого эритроцита (удобно пользоваться 11-клавишным счетчиком, условно используя разные клавиши для определенного числа делений шкалы).


Зная цену одного деления и количество эритроцитов с одинаковым числом делений, выражают результат в процентах.


Пример: эритроциты с диаметром

4,5 мкм 5 %,

6 мкм - 10%

7,5 мкм — 70 %,

9 мкм -11 %,

10,5 мкм — 4 %.

Результат можно представить и в виде эритроцитометрической кривой (кривая Прайс-Джонса), при этом на оси абсцисс откладывают диаметр в микронах, а на оси ординат процент эритроцитов. При необходимости результат выражают в виде среднего диаметра эритроцитов (см. 3.3.5).


Цитометрические исследования эритроцитов


Промеры клеток следует проводить с помощью окулярмикрометра, используя иммерсионный объектив микроскопа. На каждом мазке крови измеряют не менее 200-500 зрелых эритроцитов. Площадь поверхности эритроцитов вычисляют по формуле А. А. Чижевского для эллипсоидных эритроцитов:


S=2ab+lh,


где h=1,8+0,0915 (d-7,5);


1=1,57 (2 a +2 b );


а и b - длинная и короткая полуоси эритроцитов, мкм;


h - высота (толщина) эритроцита, мкм;


1 - длина эритроцита, мкм;


d - длинный диаметр эритроцита.


Метод используется для определения степени анизоцитоза , чтобы диагностировать анемии. Например появление макро- и мегалоцитов при пернициозной анемии.


       

Cytometric research of erythrocyte



Яндекс.Метрика