Липиды: методы цитохимического определения.
Локализуются в цитоплазме клеток главным образом в мембранах органелл и обнаруживаются преимущественно в нейтрофильных гранулоцитах. Играют важную роль в проницаемости мембран. Цитохимическое исследование основано на применении красящих веществ, растворяющихся в жирах (судан III, судан IV, черный судан и др.). Для выявления нейтрального жира пользуются суданом III, окрашивающим жир в оранжевый цвет. Липоиды выявляются лучше суданом черным (черное окрашивание).
Окраска суданом III (метод Гольдмана).
Принцип.
Растворение жиров и окраска суданом III в оранжевый цвет.
Реактивы.
1.Формалиновый спирт (1 часть формалина и 4 части 96 % спирта).
2. 70 % этиловый спирт (к 100 мл 96 % спирта прибавить 39,18 мл дистиллированной воды).
3. aльфа-Нафтол.
4. Раствор судана (к 100 мл 70 % спирта добавляют 20 мл дистиллированной воды, 1,2 г альфа-нафтола и в избытке судан III. Раствор кипятят в течение 10 мин и фильтруют).
5. Краситель Романовского .
Специальное оборудование.
Не требуется.
Ход определения.
Мазки крови фиксируют в формалиновом спирте в течение 1— З мин.
Красят в растворе судана III в течение 10 мин.
Помёщают в 70 % этиловый спирт на 1 мин.
Докрашивают красителем Романовского — или гематоксилином в течение 5— 10 мин.
Промывают дистиллированной водой.
Липиды выявляются в виде оранжевых зерен.
Нормальные величины.
В мазках периферической крови липиды содержатся в цитоплазме нейтрофилов в виде обильной зернистости. Большинство нейтрофилов (69—80 %) у здоровых людей красятся интенсивно (+ + +) 18—36 % дают окраску средней интенсивности (++) и 10% слабо окрашены (+).
СЦК липидов в нейтрофилах 2,650,033. В мазках костного мозга в миелобластах обнаружено небольшое содержание липидов, в промиелоцитах их больше и по мере созревания нейтрофилов содержание липидов увеличивается.
Клиническое значение.
Повышение содержания липидов в нейтрофилах наблюдается при острых лейкозах и обострении хронических лейкозах. При острых лейкозах, липиды в бластных клетках обнаружены у больных при миелобластном и монобластном вариантах и не выявлены при лимфобластном остром лейкозе. При недифференцированном остром лейкозе бластные клетки лишь в небольшом количестве (2,20,82 %) содержат липиды. Уменьшение липидов в нейтрофилах выявлено при ревматизме, воспалительных процессах.
| 
