Методы выявления НВ антигена
Окраска орсеином.
Данная окраска имеет наибольшее значение для диагностики гепатита В
Окраска по Шиката.
-срез поместить в 1-й раствор(9,5 мл 5%-го марганцовокислого калия+5 мл 3%-го раствора серной кислоты + 85 мл дистиллированной воды) -на 10 мин
-поместить в 2% щавелевую кислоту на 10 мин
-промыть в проточной воде 5 мин,затем в двух порциях дистиллированной воды и двух порциях 70%-го этанола
-на срез налить краситель(орсеин 4 г,70% этанол-100 мл,концентрированной соляной кислоты-2 мл)-на 4 часа
-промыть в проточной воде 10 мин
-дифференцировать солянокислым этанолом
-заключить в бальзам
РЕЗУЛЬТАТ:в цитоплазме гепатоцитов на светло-коричневом фоне тканевых элементов выявляются крупные округлые темно-коричневые включения однородного строения. Аналогично окрашиваются ядра лимфоцитов в перипортальных инфильтратах
Эластические волокна,медно-белковые комплексы окрашиваются также в коричневый цвет.
Результаты во многом определяются качеством красителя. Встречаются реактивы, не окрашивающие специфический субстрат. Поэтому при смене реактива необходимо апробировать его на материале, где уже был получен положительный результат.
Редко реактив пригоден более 2 недель, поэтому нужен свежий. Но все же встречаются орсеины, окрашивающие цитоплазму гепатоцитов диффузно, особенно на секционном материале. Поэтому предложены другие методы.
Высокоспецифичный метод для выявления НВ антигена
1.Депарафинированные и доведенные до воды срезы обрабатывают метанолом,содержащим 0,6% перекиси водорода, в течение 20 мин для подавления эндогенной пероксидазы.
2.Промывают в трех сменах фосфатного буфера(рН 7,2)
3.Инкубируют в растворе пероксидазы (5 мг на 100 мл),нанесенном на срезы, в течение 30 мин при комнатной температуре во влажной камере
4.Промывают в буфере
5.Обрабатывают диаминобензидином
6.Промывают в буфере
7.Докрашивают ядра гематоксилином Майера
РЕЗУЛЬТАТЫ: включения НВ антигена темно-коричневого цвета
| 
