КИСЛАЯ ФОСФАТАЗА (К. Ф. 3.1.3.2).
Обнаруживают преимущественно в нейтрофилах и лимфоцитах крови; локализацию связывают с лизосомами цитоплазмы клеток. Кислая фосфатаза является гидролитическим ферментом с оптимумом действия рН 5,2. для цитохимического исследования чаще используют методы азосочетания.
Метод азосочетания Берстона (модификация Ю. Ф. Руденса, И. М. Буйкиса).
Принцип.
Метод азосочетания по Кеплоу.
Реактивы.
1. 0,1 М раствор цитратного буфера (рН 5,2).
2. 0,05 М раствор хлорида магния.
3. Нафтол-АS-фосфат (можно использовать нафтол-АS-ТR-фосфат или нафтол-АS-ВI-фосфат.
4. диметилформамид.
5. диазоль синий 2С или прочный синий ВВ.
6. Краситель Романовского — Гимзы.
7. Изотонический раствор хлорида натрия.
8. Инкубационная среда: 10 мг нафтол-А-фосфата, растворенного в 5 мл диметилформамида; 15 мл 0,1 М цитратного буфера рН 5,2, 45 мд дистиллированной воды, 5 мл раствора хлорида магния, 50 мг диазоля синего. Готовят перед употреблением и используют после фильтрования.
Специальное оборудование. Термостат.
Ход исследования.
Нефиксированные мазки инкубируют в инкубационной среде при 37 °С в течение 2 ч. Промывают изотоническим раствором хлорида натрия. докрашивают красителем Романовского — Гимзы.
Промывают в проточной воде. Активность фермента выявляется в виде синей окраски.
Нормальные величины.
В сегментоядерных нейтрофилах активность фермента равна 38,6±2,82 ед., или СЦК 0,386±0,028, в лимфоцитах —26,9 ±1,94 ед., или СЦК 0,268 ±0,019. У детей активность кислой фосфатазы в нейтрофилах выше, чем у взрослых.
Клиническое значение.
Повышение активности наблюдается в нейтрофилах при воспалительных процессах, при туберкулезе, инфаркте миокарда, острых хирургических заболеваниях, злокачественных опухолях. При этом следует учитывать, что высокие цифры активности фермента могут быть результатом повышения активности щелочной фосфатазы в нейтрофилах, так как активность последней может выявляться и в кислой среде. Поскольку при всех указанных выше заболеваниях наблюдается повышение активности и щелочной фосфатазы, а при цитохимическом методе исследования обоих ферментов используют единый субстрат, при получении высокой активности кислой фосфатазы М. Г. Шубич и И. В. Нестерова предлагают проводить повторное исследование после ингибирования щелочной фосфатазы с помощью ЭДТА.
Повышение активности кислой фосфатазы в лимфоцитах отмечается при иммунизации, различных аллергических заболеваниях.
В бластных клетках при острых лейкозах характер распределения продукта реакции различен в зависимости от формы лейкоза. При острых лимфобластных формах активность выявляется в гранулярной форме, при миелобластных — в диффузной форме.
| 
