КИСЛАЯ а-НАФТИЛАЦЕТАТ-ЭСТЕРАЗА.
Фермент локализуется главным образом в лизосомах цитоплазмы клеток и участвует в гидролизе алифатических эфиров.
Принцип.
Соединения альфа-нафтилацетата при кислом рН под влиянием фермента образуется свободный нафтол, дающий цветное окрашивание с фуксином.
Реактивы.
1. 2,5 % раствор глутаральдегида (рН 7,2).
2. 4 % раствор солянокислого фуксина.
3. 4 % раствор нитрата натрия.
4. 0,7 фосфатный буфер (рН 5,0).
5. a-Нафтилацетат. 6. 2 % раствор метилового зеленого.
7. Инкубационная среда: 2 мл реактива № 2, 2 мл реактива № 3, 40 мл реактива № 4. 10 мг a-нафтилацетата, растворенного в 0,4 мл ацетона. Инкубационная среда должна иметь рН 5,8 и готовиться перед употреблением.
Специальное оборудование.
1.Холодильник.
2. Весы.
З. Эксикатор.
Ход определения.
Высушенные воздухе мазки фиксируют в глутаральдегиде (реактив №1) при температуре 4 °С в течение10 мин (нефиксированные мазки можно хранить холодильнике 1—2 мес.). Промывают дистиллированной водой. Инкубируют в инкубационной среде в течение 1,1/2-6 ч. Промывают дистиллированной водой. докрашивают метиловым зеленым.
Нормальные величины.
В цитоплазме лимфоцитов активность фермента выявляется в виде темно-красных гранул, в нейтрофилах и моноцитах — в виде диффузной окраски. СЦК лимфоцитов равен 0,57±0,04. Активность фермента увеличивается при увеличении времени инкубации. Так, при инкубации в течение 1,1/2 ч активность фермента выявлена 49,83±2,75 % лимфоцитов, при удлинении срока инкубации до б ч эстеразоположительными становятся 79,7±1,52 % лимфоцитов. Использование в качестве фиксатора формалина дает более стабильные результаты.
Клиническое значение.
Снижение активности фермента в лимфоцитах характерно для хронического лимфолейкоза (В-клеточного варианта); при Т-клеточных пролиферациях активность неспецифической кислой эстеразы в лимфоцитах повышена.
| 
