Некоторые методы исследования беспозвоночных.
Методы исследеования простейших.
Наблюдения в живом состоянии.
Одним из основных методов изучения строения, простейших является наблюдение их в живом состоянии. Весьма важно регулировать при этом освещение. В ярком проходящем свете при открытой диафрагме и поднятом осветителе детали строения прозрачных простейших почти неразличимы. Необходимо, регулируя отверстие диафрагмы и положение осветителя, несколько затемнять поле зрения. При достаточном навыке можно рассмотреть почти все подробности строения простейшего.
Свободно живущих простейших необходимо рассматривать в естественной для них среде — пресной или морской воде, или же в той жидкости, в которой они культивируются; паразитических — в тканевой или полостной жидкости хозяина. В случае необходимости можно пользоваться физиологическим раствором. При длительном изучении паразитов теплокровных животных следует применять нагревательный столик.
Простейшее в капле соответствующей жидкости помещается на предметное стекло и накрывается покровным. При длительном наблюдении для предотвращения испарения воды и связанного с этим повышения концентрации солей края покровного стекла надо обмазывать парафином или вазелином.
Для длительного наблюдения следует пользоваться также висячей каплей во влажной камере. Для того, чтобы предохранить объекты от раздавливания покровным стеклом, на нем часто делают восковые ножки. Для этого углами покровного стекла осторожно царапают воск, предварительно размягченный пальцами. Благодаря этому на углах покровного стекла образуются небольшие восковые ножки, препятствующие опусканию стекла и раздавливанию объекта. Лучше брать не чистый воск, а приготовленную при нагревании смесь его с терпентином (2,5 г воска и 1 г терпентина).
Для этой же цели под покровное стекло подкладывают тонкие стеклянные нити, волосы и т. п.
Изучение часто затрудняет подвижность простейших, особенно инфузорий. Для уменьшения подвижности можно перенести простейших в каплю не густого раствора вишневого клея или чистого гуммиарабика, но надо иметь в виду, что нередко при этом происходит деформация тела животного. Хорошие результаты дает подкладывание под покровное стекло, волокна фильтровальной бумаги, гигроскопической ваты и т. п. Благодаря тигмотаксису инфузории останавливаются около волоконец часто на довольно продолжительное время. Наконец, можно осторожно надавливать на простейших покровным стеклом, отсасывая воду фильтровальной бумагой. У некоторых инфузорий (стентор, сувойки) можно добиться тепловой анестезии, очень осторожно нагревая их до 30—35°. Анестезия при помощи обычных анестезирующих веществ почти никогда не удается.
Все предметные и покровные стекла, камеры, часовые стекла и т. п., в которые помещаются простейшие для наблюдения, должны быть совершенно чистыми и употребляться только для прижизненных наблюдений. Мыть стекла нужно сначала мылом, потом горячей проточной водой и наконец дистиллированной водой. Если они были в соприкосновении с фиксаторами, ядами и т. п., то их нельзя употреблять для живых простейших. Стекла следует вытирать платками, употребляемыми исключительно для этой цели. Несоблюдение всех этих правил влечет за собой гибель простейших.
Для прижизненного изучения строения простейших следует широко пользоваться темным полем, в котором ряд деталей их строения виден значительно лучше, чем при обычном освещении (жгуты, реснички, мембранеллы, цирры, скелетные нити, различные зерна и т. д.).
Для изучения токов жидкости, вызванных движением простейших, и процессов образования в них пищеварительных вакуолей в воду надо добавлять мелкорастертый кармин или тушь (не жидкую, натереть с палочки сухой туши!). Цвет взвеси должен быть серым для туши и светло-розовым для кармина. Через 10—15 минут в теле инфузорий будут хорошо заметны черные или красные пищеварительные вакуоли.
В заключение следует еще раз указать, что изучение простейших в живом состоянии совершенно необходимо. Всякая, даже самая совершенная фиксация влечет за собой свертывание белков и связанное с этим хотя бы некоторое изменение структур. Поэтому чрезвычайно желательно во всех случаях сравнивать фиксированный и живой объект. При наблюдении многоклеточных это часто очень затруднительно, а во многих случаях и просто невозможно. Выделение клеток или тканей из организма многоклеточного животного уже само по себе повреждает клетки и если исключить наблюдение культуры тканей и некоторых прозрачных животных, то обычно приходится наблюдать не живые, а переживающие клетки. Простейшие микроскопически малы, прозрачны, могут долго жить в условиях, позволяющих вести наблюдение под микроскопом и поэтому представляют собой превосходные объекты для изучения в живом состоянии и экспериментирования. Нужно использовать при этом все возможности, которые дает современная микроскопия (исследование в проходящем свете, темное поле, фазово-контрастная микроскопия, аноптральный микроскоп, витальное окрашивание и т. д.)
|
