Приготовление и фиксация мазков крови
Подготовка стекол
Мазки крови делают на предметных стеклах с помощью более узкого шлифованного предметного стекла.
Подготовка стекол.
1. С предметных стекол, бывших в употреблении и соприкасавшихся с иммерсионным маслом, последнее удаляют сухой тряпкой или бензином. Затем стекла кипятят без мыла и соды в течение 15—20 мин, промывают чистой водой и погружают на 1 ч в насыщенный раствор двухромовокислого калия в серной кислоте. Обработанные таким образом стекла промывают в течение не менее 1 ч под струей водопроводной воды и насухо вытирают чистым полотенцем.
2. При отсутствии двухромовокислого калия и серной кислоты стекла, бывшие в употреблении, кладут в мыльный раствор и выдерживают в нем 8—10 ч, а затем в том же растворе кипятят их 5—10 мин.
От более длительного кипячения стекла делаются мутными.
После кипячения стекла вынимают и тщательно промывают под струей водопроводной воды, а затем насухо вытирают.
3. Стекла, не бывшие в употреблении, промывают в горячей воде и насухо вытирают. Хранят стекла в стеклянной широкогорлой банке с крышкой.
Приготовление мазков.
Взяв предметное стекло за длинные края, прикасаются его поверхностью (отступя 0,5—1 см от узкого края) к капле крови (но не к коже). Предметное стекло держат на столе или в левой руке за узкие края. Правой рукой приставляют шлифованное стекло узким краем к стеклу с кровью слева от капли под углом 45° и продвигают его вправо до соприкосновения с кровью.
Выжидают, пока кровь расплывется по всему ребру шлифованного стекла, и затем легким быстрым движением ведут его справа налево до тех пор, пока не будет исчерпана вся капля. Капля крови должна быть небольшой и соразмерена так, чтобы весь мазок помещался на стекле, не доходя 1—1,5 см до его края. Нельзя прекращать размазывание и отнимать стекло раньше, чем капля будет исчерпана. Нельзя также сильно нажимать на стекло, так как многие клетки могут оказаться поврежденными. Хорошо сделанный мазок тонок, имеет желтоватый цвет и оканчивается «метелочкой».
Густо-розовые и красноватые мазки непригодны для счета, так как они слишком толсты и клеточные элементы при этом дифференцировать невозможно. После приготовления мазки быстро сушат на воздухе до исчезновения влажного блеска. При медленном высыхании может изменяться морфология клеток.
На высушенном мазке уголком предметного стекла или карандашом (только не химическим) пишут фамилию, инициалы больного, дату. При необходимости переслать мазок с консультационной целью в другой город мазок рекомендуется делать на хорошо отмытой использованной рентгеновской пленке, нарезанной по размеру предметного стекла.
Такие мазки можно пересылать в письмах.
Симптом крошковатости мазка крови.
При заболеваниях, протекающих с повышенным содержанием фибриногена в крови, мазок, сделанный на предметном стекле, имеет крошковатый характер. На этот простой, и доступный признак рекомендуется обратить особое внимание при взятии крови.
Фиксация мазков.
Принцип.
Обработка мазков фиксирующими жидкостями, придающими форменным элементам стойкость по отношению к содержащейся в красках воде, которая без фиксации мазков гемолизирует эритроциты и изменяет строение лейкоцитов. Кроме того, фиксация, вызывая коагуляцию белка, прикрепляет препарат к стеклу.
Посуда и аппаратура.
1. Пинцет.
2. Специальная посуда для фиксации или стаканы, обрезанные до высоты 6—6,5 см.
3. Штатив для сушки мазков на воздухе.
4. Предметные стекла.
Реактивы.
Химически чистый метиловый спирт (метанол) или 96° этиловый спирт, или денатурированный спирт, или смесь Никифорова, состоящая из равных количеств этилового спирта и серного эфира.
Лучшим фиксатором является метиловый спирт.
Методика.
Высохшие на воздухе мазки крови, сложенные попарно (мазками наружу), опускают пинцетом в специальную посуду для фиксации или в обыкновенные стеклянные стаканы, обрезанные до 6—6,5 см и наполненные до определенной высоты фиксирующей жидкостью. В последнем случае для обеспечения свободного соприкосновения намазанных сторон препаратов с фиксатором сверху, между попарно сложенными мазками, прокладывают предметные стекла, опирающиеся своими ребрами на верхнюю часть стакана. В метиловом спирте мазки выдерживают не менее 5 мин, а в этиловом и денатурированном спирте и смеси Никифорова — не менее 30 мин.
По окончании срока фиксации препараты вынимают пинцетом, сушат на воздухе или ополаскивают в банке с нейтрализованной дистиллированной водой и укладывают мазками кверху на стеклянный мостик для окраски.
Фиксация мазков по Яхонтовой.
Принцип.
Повышение качества фиксации этиловым спиртом за счет предварительной обработки его цитратом и оксалатом натрия.
Посуда и аппаратура.
1. Цилиндры емкостью 100 мл.
2. Пипетки, стеклянные палочки для размешивания.
3. Водяная баня.
4. Пинцет.
5. Специальная посуда для фиксации или стаканы, обрезанные до высоты 6—6,5 см.
6. Штатив для высушивания мазков на воздухе.
Реактивы.
Готовят 2 реактива.
1. В цилиндр емкостью 100 мл вносят 1,5 г цитрата натрия, приливают 1,5 мл дистиллированной воды, размешивают стеклянной палочкой и для ускорения растворения помещают цилиндр в горячую водяную баню. В полученный слегка мутноватый раствор приливают этиловый спирт до объема 100 мл и тщательно, в течение 5—8 мин, размешивают. При размешивании на дне цилиндра образуется клейкое белое вещество, тянущееся за палочкой.
Раствор оставляют в покое на сутки для отстаивания.
2. Реактив готовят так же, как и предыдущий, но вместо цитрата натрия берут оксалат натрия.
Методика.
Прозрачные реактивы 1 и 2 через сутки после их приготовления сливают в равных количествах и в этой смеси фиксируют сухие мазки крови в течение 20—30 с, после чего их подсушивают на воздухе (можно и не сушить!) и окрашивают.
Если при окраске эритроциты получаются не бледно-розовые, а серовато-розовые, то прибавляют раствор цитрата натрия в большем количестве. Качество окраски при такой фиксации получается хорошее, поэтому при отсутствии метилового спирта может быть применен описанный выше фиксатор.
Фиксация мазков парами фенола (по Сюткину).
Принцип.
Получение хорошего качества фиксации мазков при отсутствии спирта.
Посуда и аппаратура.
1. Эксикатор.
2. Стеклянный мостик для мазков.
3. Термометр.
Реактивы.
1. Кристаллический фенол.
2. Дистиллированная вода.
Методика.
В эксикаторе заменяют фарфоровую подставку на стеклянный мостик для мазков. Притираемые поверхности эксикатора и его крышки смазывают вазелином. На дно эксикатора наливают жидкий фенол (90 весовых частей кристаллического фенола и 10 весовых частей дистиллированной воды) из расчета 100 мл на 1,4 л объема эксикатора. В близи эксикатора на стене вешают термометр. Приготовленные обычным способом сухие мазки крови помещают в эксикатор на мостике в один ряд намазанной поверхностью вниз.
Для сохранения формы эритроцитов, лейкоцитов и дифференцированной окраски зернистости лейкоцитов воздействие на мазки крови паров фенола должно продолжаться в зависимости от комнатной температуры строго определенное время: при температуре 16—18° — 20 мин, при 19—21°—10 мин, при 22—24° — 5 мин, при 25—27° — 3 мин.
По истечении этого времени мазки вынимают, раскладывают на столе намазанной поверхностью кверху. Время выветривания мазков должно быть не менее времени фиксации. Время фиксации мазков крови парами фенола может быть сокращено до 1ч-1ч30мин в условиях термостата при 28—30°.
Время освобождения от паров фенола при воздействии его в течение 10— 20 мин может быть в срочных случаях сокращено до 5 мин путем подогревания при 37° в термостате, сушильном шкафу, на батареях водяного отопления или выветриванием настольным электровентилятором.
Если применяют жидкий фенол, качество которого бывает различным, то время фиксации может не совпасть с указанным выше.
В этом случае во избежание ошибок производят пробную фиксацию нескольких мазков в течение 3; 5; 10; 15; 20; 25 мин.
После окраски мазков отбирают те из них, в которых хорошо выражена нейтрофильная зернистость и отсутствует гемолиз эритроцитов. То же проделывают при возможных колебаниях комнатной температуры.
По отобранным мазкам составляют таблицу времени фиксации парами фенола в зависимости от температуры в комнате.
Недостаточная фиксация мазков дает слабую окраску нейтрофильной зернистости, а недостаточное освобождение мазков от паров фенола ведет к гемолизу эритроцитов при окраске или окрашиванию мазка в красный цвет.
| 
