Получение лейкоконцентрата

Получение лейкоконцентрата

Метод Поспеловой.

Принцип.

Фракционирование составных частей крови за счет различия их удельного веса и ускорения оседания эритроцитов трилоном В.

Посуда и аппаратура.

1. Центрифужные цилиндрические пробирки емкостью 10 мл с резиновыми пробками.

2. Пипетки измерительные.

3. Пипетки тонкие пастеровские.

4. Термостат.

5. Центрифуга 1500 об/мин.

6. Штатив для мазков.

7. Штатив для установки пробирок под углом 45°.

8. Шприц.

9. Предметные стекла.

Реактив.

3% раствор трилона В.

Методика.

В мерную центрифужную пробирку от­меривают 1 мл 3% раствора трилона В и 4 мл крови, взятой из вены самотеком. Осторожно смешивают и ставят в термостат под углом 45° при температуре 37° на 15—20 мин. Как только отделится 2—3 мл плазмы, верхний слой ее осторожно отсасывают пастеровской пипеткой и выливают. Нижний слой плазмы и лейкоцитарную пленку отбирают в центрифужную пробирку.

Центрифугируют в течение 10 мин при 1500 об/мин. Из осадка готовят мазки, красят, как обычные мазки периферической крови.

При лейкопении берут двойной объем крови и трилонаВ.

Кровь можно брать не натощак.

Состав лейкоконцентрата венозной крови здоровых людей приведен в табл.4.

Микрометод лейкоконцентрации

(метод Емешиной)

Принцип.

В отличие от всех других методов лейкоконцентрации здесь ограничиваются весьма неболь­шим количеством крови, взятым из пальца, а не из вены больного.

Посуда и аппаратура.

1. Мерные центрифужные пробирки.

2. Штатив для пробирок.

3. Пипетки Пастера.

4. Микроцентрифуга .

5. Штатив для мазков.

6. Предметные стекла.

7. Копье для прокола кожи.

Реактивы.

Разводящий раствор:

3 г нейтрального цитрата натрия,

3 г сахарозы,

100 мл 2,5% раствора желатины,

0,2 г альбуцида.

Методика.

В мерную центрифужную пробирку отмеривают 0,25 мл разво­дящего раствора и, проколов кожу пальца больного, набирают в ту же пробирку 0,5 мл крови. Для предупреждения образования сгустка стекающую по стенке пробирки кровь перемешивают с разводящим раствором. Затем пробирку с разве­денной кровью ставят в штатив на 30—35 мин при комнатной температуре до образования в ней двух четко разграниченных слоев. Надосадочную жидкость со взвешенными в ней лейкоцитами, тромбоцитами и небольшой примесью эритро­цитов осторожно отсасывают пастеровской пипеткой и переносят в пробирку микроцентрифуги. Центрифугируют 3—4 мин со скоростью 7—8 оборотов ручки в минуту, что соответствует 700—800 об/мин центрифуги. Центрифугиро­вание с большим числом оборотов вызывает частичное разрушение лейкоцитов. По окончании центрифугирования надосадочную жидкость из пробирки отсасы­вают, а из осадка с минимальным количеством надосадочной жидкости делают мазки, которые фиксируют и окрашивают по Паппенгейму—Крюкову или по Рома­новскому.

Описанным методом пользуются и при гистохимическом изучении форменных элементов белой крови на содержание в них РНК и ДНК, а также для подсчета жизнеспособных миелокариоцитов в костном мозге у больных аплазией.

Метод лейкоконцентрации из малых количеств крови прост и может приме­няться в любой лаборатории.

Клиническое значение.

Лейкоконцентрация применяется при больших лейкопениях, алейкемических формах лейкоза, для выявления опухолевых клеток, внутриклеточных паразитов, LE-клеток и др.