Окраска по Нохту

Окраска по Нохту

Реактивы:

1) 1 г/л водный раствор азура II (1 г красителя растворяют в 1000 мл дистиллированной воды1)

2) 1 г/л водный раствор эозина К (1 г красителя растворяют в 1000 мл дистиллированной воды). Оба реактива можно использовать через 14 дней после приготовления.

Хранят их раздельно в посуде из темного стекла с притертой пробкой при комнатной температуре;

3) фосфатный буфер — pH 6,8 - 7,2.  

Приготовление забуференной воды:

Взвесить на аналитических весах с точностью ±0,01 г 9,50 г натрия  фосфорнокислого  двузамещенного

безводного  или  22,70  г натрия  фосфорнокислого  двузамещенного  12-водного;  навеску перенести в мерный цилиндр вместимостью 1000 мл, добавить 900 мл дистиллированной воды, перемешать до растворения, довести до 1000 мл дистиллированной водой и тщате льно перемешать (раствор 1).

Взвесить на аналитических весах с точностью ±0,01 г 9,07 г калия фосфорнокислого однозамещенного; навеску внести в мерный цилиндр вместимостью  1000  мл,  добавить  900  мл  дистиллированной  воды, перемешать  до  растворения,  довестидо  1000  мл  дистиллированной водой и тщательно перемешать (раствор 2).

Внести в мерный цилиндр вместимостью 1000 мл 63 мл раствора 1 и 37 мл  раствора  2,  довести  до  1000  мл  дистиллированной  водой  и определить рН полученной

забуференнойводы на рН-метре; рН должен находиться в диапазоне 6,8 - 7,2. Полученную забуференную  воду  можно  хранить  при  комнатной температуре (+18/+25°С).

4) метанол.

Непосредственно перед употреблением готовят рабочий раствор, смешивая 25 мл 1 г/л раствора азура II, 20 мл 1 г/л раствора эозина К и 55 мл буферного раствора. Пропорции красителей могут несколько варьировать, поэтому они должны быть установлены опытным путем каждый раз при приготовлении свежей партии растворов азура II и эозина К.

Техника окраски.

После фиксации метанолом сухие мазки, разложенные на мостике (или находящиеся в контейнере аппарата для массовой фиксации и окраски), заливают рабочим раствором краски и красят от 20 до 45 мин, затем препараты тщательно смывают водой1 и высушивают на воздухе; с этой целью препараты ставят в штатив под углом 60—65°.

1 Дистиллированная вода, используемая для приготовления красителей и смывания краски, должна иметь нейтральную реакцию.