Методика окрашивания корешков,
бутонов и других тканей
реактивом Шиффа по Фельгену
1. Материал хранится в 75° спирте. Фиксатор 6:3:1.
Вся дальнейшая работа с материалом проводится в стеклянных трубочках, снизу затянутых газовой сеткой, эти пробирки, пинцетом, переносятся из бюкса в бюкс с соответствующими растворами; .
2. в 50° спирт на 5-10 мин.
3. дистиллированная вода - 5-10 мин.
4. 1N HCI хол. (комнатной температуры) - 1-2 мин.
5. гидролиз при 58-60°С (не выше!) - 6-8-10 мин. (1N HCI гор. с термометром - заранее нагретая в бюксе до 61°С на водяной бане). Процесс гидролиза регулируется вручную.
6. 1N HCI хол. - 1 сек.
7. дистиллированная вода - 1-2 мин.
8. Фуксинсернистая к-та - 1,5-2 часа (лучше 4 часа) (окрашивание проводится в плотно закрывающемся бюксе, под темным колпаком!).
9. сернистая вода I - 5-10 мин
| В плотно закрывающихся
бюксах, под темным
колпаком!
| 10, сернистая вода II - 5-10 мин
| 11. сернистая вода III - 5-10 мин
|
(приготовляется непосредственно перед употреблением!)
12. проточная вода - 20 мин.
13. дистиллированная вода
14. уксусная к-та 45% - приготовляется давленый препарат (неиспользованный окрашенный материал можно сохранить в 70° спирте или дистиллированной воде, в холодильнике, не более 1 суток)
15. препараты можно перевести в постоянные, используя сухой лед; по восходящей проводке спиртов, толуол(ксилол) и заключить в бальзам.
16. окраска цитоплазмы светлым зеленым 0,1% р-ром - 1-3 мин. (после 70° спирта).
Ядра окрашиваются в ярко-красный цвет! цитоплазма и ядрышки - в зеленый!
Приготовление реактивов:
а) 1 N HCN - 82,5 мл КОНЦ. НСI уд.вес = 1,19+917,5 мл дистил. воды;
б) Фуксинсернистая к-та - основной фуксин (0,25 г) залить кипящей дистил. водой (50 мл), взболтать, профильтровать, остудить до 50°С, прибавить 1 HCI (5 мл), быстро охладить до 24-25°С, всыпать сухого бисульфита натрия (0,25 г) и плотно закрыть притертой пробкой склянку из темного стекла - на ночь для обесцвечивания.
Реактив должен быть соломенного цвета!
в) Сернистая вода - 2,5 мл 10% бисульфита натрия - 50мл дистил. воды + 2,5 мл 1N HCI (исходные растворы сливаются непосредственно перед употреблением!).
ПЕРЕВОД ВРЕМЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ В ПОСТОЯННЫЕ
1. Поместить временный препарат на ровную поверхность сухого льда на 1-3 минуты.
2. Подышав на покровное стекло, быстро лезвием безопасной бритвы сбросить его с препарата (примороженный объект должен остаться на предметном стекле).
3. Опустить препарат в 70° спирт на 3 минуты.
4. Перенести препарат в 96° спирт - 3 минуты.
5. Перенести препарат во второй 96° спирт - 1-2 минуты.
6. Перевести препарат в 100° спирт - 3 минуты,
7. Перевести препарат во второй 100° спирт - 3 минуты.
8. Перенести препарат в смесь абсолютного спирта и толуола (1:1) - 5 минут.
9. Перенести препарат в толуол - 3 минуты.
10. Перенести препарат во второй толуол - 3 минуты.
11. Нанести на объект каплю канадского бальзама и покрыть чистым покровным стеклом.
12. Придерживая за край покровное стекло, легким надавливанием удалить из-под покровного стекла пузырьки воздуха и избыток бальзама.
13. Высушить препарат в термостате или - на воздухе (не менее суток).
14. После подсушивания препарата избыток бальзама с предметного стекла удалить тряпочкой, смоченной в толуоле.
Для подкрашивания цитоплазмы при окраске хромосом по Фельгену после выдерживания препарата в 70° спирте (пункт 3) на объект наносят несколько капель Лихтгрюна (1% раствор на 96° спирте). После 1-2 минут краску смывают 96° спиртом. Последующие операции, начиная с п.4, проводят в том порядке, как указывалось ранее.
Во избежание загрязнения батареи при переводе препарата из одной жидкости в другую край стекла следует промокать фильтровальной бумагой.
| 
