Выявление кератина и слизи по Крейбергу
Фиксированный в 10 % растворе формалина материал заливают в целлоидин или парафин.
Для окрашивания готовят алыдиановый синий, сафранин и эритрозин.
1. Альциановый синий: 50 мл 1 % водного раствора альцианового синего + 50 мл 1 % раствора уксусной кислоты + 10 мг тимола.
2. Сафранин: 5 г сафранина смешивают в термостойкой посуде со 100 мл 100 % спирта, затем кипятят на водяной бане 1 ч.
Полученный раствор сливают в бутылку и к осадку добавляют еще 100 мл 100 % спирта. Вновь кипятят, повторяя эту процедуру не менее 5 раз. Полученный экстракт (700 мл раствора позволяют окрасить 1000 срезов) фильтруют и хранят в тщательно закрытой посуде.
3.Эритрозин: на водяной бане готовят 1 % водный раствор эритрозина, затем фильтруют и добавляют 10 мг тимола.
Методика окраски
1.Депарафинированные срезы ополаскивают в дистиллиро-ванной воде.
2.Ядра окрашивают любым гематоксилином без длительной дифференцировки.
3.Очень быстро дифференцируют в 0,5 % растворе соляной кислоты.
4.Тщательно просушивают фильтровальной бумагой.
5.Переносят в раствор эритрозина на 5 мин.
6.Очень быстро ополаскивают в дистиллированной воде, 96 % спирте, дистиллированной воде.
7.Переносят в раствор альцианового синего на 3 — 5 мин.
8.Быстро обезвоживают в 96 % спирте.
9.Погружают в раствор сафранина — 5 мин.
10.Ополаскивают в 2 сменах 100 % спирта.
11.Просветляют и заключают по любой методике.
Результат: ядра клеток темно-синие, кислые гликозаминогликаны голубые, клетки красные, прочие ткани розовые и фиолетовые.
|