Микроскопия вирусов
Как известно, вирусы не могут быть рассмотрены в световом микроскопе. Поэтому изучению в обычном микроскопе подвергают включения, или ткани, пораженные вирусом. Изучение изменений, происходящих в тканях, проводят с помощью методов и приемов гистологического исследования, которые рассматриваются в соответствующих руководствах.
Препараты для микроскопии элементарных телец и включений готовят из мазков и отпечатков органов и тканей.
Предметные стекла готовят, как указано выше.
Приготовленные мазки немедленно фиксируют. С этой целью применяют простые и сложные фиксаторы. Среди простых чаще других употребляют метиловый спирт, смесь этилового (абсолютного) спирта и эфира (поровну), ацетон.
Среди сложных применяют:
1) смесь Дюбоска — Бразиля — Буэна: пикриновой кислоты 1 г, продажного (40%) формалина 60 мл, спирта (80°) 150 мл и ледяной уксусной кислоты 15 мл;
2) сулемовые смеси:
а) Шаудина: 2 части насыщенного раствора сулемы и 1 часть абсолютного спирта;
б) Ценкера: сулемы 5 г, двухромовокислого калия 2,5 г, сернокислого натрия 1 г, ледяной уксусной кислоты 5 мл, дистиллированной воды 100 мл. Уксусную кислоту добавляют в смесь перед употреблением;
в) Хелли — Максимова: сулемы 5 г, двухромовокислого калия 2,5 г. неоазведенного продажного формалина 10 мл, 2% раствора осмиевой кислоты 10 мл, дистиллированной воды 100 мл.
Формалин и осмиевую кислоту добавляют в смесь перед употреблением.
Окраска препаратов.
Из методов окраски распространены следующие.
Окраска по Романовскому.
Высушенные на воздухе препараты без фиксации опускают на 1—2 минуты в раствор неразведенного красителя Романовского. Затем их промывают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и микроскопируют с иммерсионной системой.
Элементарные тельца, окрашиваемые этим способом, имеют синий цвет на голубом фоне препарата.
Окраска по Муромцеву.
Влажные мазки или отпечатки фиксируют 1—2 часа в этиловом или метиловом спирте комнатной температуры или 15—20 минут в спирте, подогретом до 50—70". После промывания дистиллированной водой красят 5—10 минут синькой Мансона,разведенной в 40 раз.
Синька Мансона: в 100 мл кипящей воды растворить 5—8 г химически чистой буры, добавить 2 г метиленового синего. Окрашенный препарат, не промывая, дифференцируют 5—10 минут в водном растворе танина (5—10%). После приобретения препаратом голубоватого оттенка его промывают дистиллированной водой и подсушивают фильтровальной бумагой. Препарат проводят через абсолютный спирт или 50% смесь абсолютного спирта с ацетоном, после чего он готов для микроскопии.
В окрашенном этим способом препарате фон и цитоплазма клеток бледно-голубые, тельца Бабеша — Негри резко очерчены, фиолетовые с розовым оттенком, ядра синие, ядрышки темно-синие, эритроциты оранжево-красные.
Окраска по Морозову.
Приготовление реактивов и порядок окраски см (Серебрение по Морозову). При окраске этим методом элементарные тельца имеют вид темно-коричневых, почти черных зерен на светло-коричневом фоне.
Окраска по Селлеру.
Влажный мазок или отпечаток без фиксации 10 секунд окрашивают смесью из насыщенных растворов в метиловом спирте основного фуксина (3—5 мл) и метиленового синего (15 мл) и чистого метилового спирта (25 мл). Промывают проточной водой, сушат на воздухе, и препарат готов для микроскопии.
Тельца Бабеша — Негри пурпурно-красные, цитоплазма ядра и ядрышка синяя, эритроциты кирпично-красные.
Окраска по Пигаревскому.
Препарат, высушенный на воздухе в течение 10 минут и нефиксированный, окрашивают 1 минуту смесью, состоящей из насыщенных растворов метилового зеленого (3,2 мл), пиронина (6 мл), оранжевого Ж (1 мл) и дистиллированной воды (75 мл).
После промывания проточной водой дальнейшая окраска, как по Селлеру (см. выше).
При микроскопии протоплазма клеток сиреневого цвета, цитоплазматические включения ярко-красные.
Окраска по Павловскому.
Препараты окрашивают в течение 3—5 секунд красителем, приготовленным из 10 мл дистиллированной воды, 1 капли насыщенного спиртового раствора основного фуксина и 8 капель насыщенного спиртового или водного раствора метиленового синего.
Краситель смывают проточной водой и препараты высушивают на воздухе.
| 
