8. ПОРЯДОК РАБОТЫ
8.1. Работа в проходящем свете
Для исследования и фотографирования объектов, изучаемых под микроскопом, в комплекте микроскопа предусмотрено три источника света. Тип источника света выбирает сам исследователь в зависимости от предполагаемого метода микроскопирования.
Для работы в проходящем и отраженном свете рекомендуется пользоваться лампой накаливания ОП12-100, питание которой осуществляется через унифицированный источник питания «Гранат». Порядок работы с источником питания «Гранат» изложен в его паспорте.
8.2. Выбор объективов
К микроскопу прилагается большой набор объективов, но в револьвер микроскопа рекомендуется устанавливать объективы нужного увеличения, выбранные из одной группы, в соответствии с табл. 2 и 3 настоящего описания.
Исследование объекта следует начинать с объективом наименьшего увеличения, который используется в качестве искателя при выборе участка объекта для более подробного изучения.
После того как с объективом малого увеличения (3,5; 9; 10) выбран участок для изучения, установите его с помощью механизма перемещения столика в центр поля микроскопа. (Если эта операция выполнена недостаточно аккуратно, интересующий наблюдателя участок не попадает в поле микроскопа более сильного объектива). Затем поверните револьвер для включения в ход лучей требуемого по увеличению объектива, сфокусируйте микроскоп на объект и, если нужно, подправьте настройку освещения.
На корпусе объективов масляной иммерсии имеется черное кольцо, на корпусе объективов водной иммерсии — белое кольцо.
Прежде чем перейти к работе с иммерсионным объективом, включите объектив 16х или 20х и как можно точнее приведите в центр поля микроскопа выбранный для исследования участок объекта. Затем стеклянной палочкой нанесите на фронтальную линзу иммерсионного объектива и на объект но кайле иммерсиоппого масла (или дистиллированной воды при работе с объективами водной иммерсии).
Для работы с малоконтрастными объектами рекомендуется использовать апертуру осветительной системы, не превышающую 2/3 апертуры иммерсионного объектива, поэтому наносить слой иммерсионной жидкости между фронтальной линзой конденсора и предметным стеклом препарата не требуется. В тех случаях, когда апертуру осветительной системы требуется довести до полной апертуры иммерсионного объектива, па фронтальную линзу конденсора нанесите несколько капель иммерсионного масла или воды, после чего конденсор поднимите до соприкосновения капли жидкости с предметным стеклом. При этом апертурную диафрагму откройте полностью. После работы иммерсионную жидкость с конденсора, объектива и объекта снимите тряпочкой или ватой, навернутой на деревянную палочку или спичку и слегка смоченной спиртом или ксилолом.
Фокусировку микроскопа при работе с сильными объективами производите так, чтобы не повредить объект и фронтальную линзу объектива.
Объективы водной иммерсии чувствительны к изменению толщины покровных стекол, так как показатель преломления воды отличается от показателя преломления покровного стекла. Наилучшее качество изображения с этими объективами можно получить только при применении покровных стекол толщиной 0,17 мм.
В слое жидкости между фронтальной линзой объектива с объектом на пути лучей не должно содержаться пузырьков воздуха.
ВНИМАНИЕ!
Иммерсионный объектив 100x1,25 (масляная иммерсия) во избежание вывода из строя промывать только петролейиым эфиром или чистым бензином.
8.3. Работа в светлом поле с панкратическим конденсором ПК-3
При настройке снимите заглушку на основании микроскопа, установите на ее место узел апертурной диафрагмы 84 (см. рис. 8) и зажмите винт 83. Наденьте на вертикальные направляющие типа «ласточкин хвост» микрометрического механизма кронштейн 69 конденсоров, опустите его до упора и закрепите винтом; установите в кронштейн конденсор ПК-3, зажмите винт 122 (см. рис. 12) и поднимите конденсор до упора.
Вставьте в вертикальные направляющие микрометрического механизма предметный столик КС-2 и зажмите винт 114 (см. рис. 10). При установке скользящего столика (см. рис. 11) отожмите винт 112 (см. рис. 10), отвинтите (не до конца) центрировочные винты 113 и, притягивая верхнюю часть предметного столика к себе, выньте ее из кольца; в освободившееся кольцо столика вставьте скользящий столик. Включите в ход лучей разрешающая способность микроскопа. Для уменьшения освещенности изображения объекта вложите в гнездо осветителя один из нейтральных светофильтров или с помощью ручки регулирования выходного напряжения, расположенной на передней панели унифицированного источника питания «Гранат», снизьте накал лампы.
Выдвиньте рукоятку 94 (см. рис. 8), вращением диска 71 включите одно из увеличений насадки и приступайте к исследованиям.
 
8.4. Работа с телеобъективом и конденсором КОН-3 в светлом поле
и с конденсором ОИ-13 в темном поле.
Телеобъектив в оправе 103 (см. рис. 12) и конденсор КОН-3 123 при включенной в ход лучей ахроматической линзе рекомендуется применять при исследованиях, требующих малого увеличения (при изучении гистологических и анатомических крупных структур), или при обзорном фотографировании.
Для работы с телеобъективом в оправе 103 (см. рис. 9) снимите апертурную диафрагму и на ее место поставьте телеобъектив, после чего установите на кронштейн 69 (см. рис. 8) конденсор КОН-3 на собственном кронштейне (при работе в светлом иоле) или конденсор ОИ-13 128 (см. рис. 12) (при работе в темном поле).
Включите в ход лучей ахроматическую линзу 15 (см. рис. 1), для чего рукоятку 101 (см. рис. 9) переместите на себя до упора.
При настройке освещения для обзорной работы необходимо включить в ход лучей объектив 3,5х или 9х.
Для наблюдения изображения источника света положите матовое стекло па оправу 103 телеобъектива. Установите рукоятку 76 (см. рис. 7) коллектора в среднее положение и, наблюдая за изображением нитей лампы на матовом стекле, перемещайте лампу вдоль оси до появления наиболее резкого изображения нитей лампы; закрепите лампу винтом 74 и с помощью винтов 75 приведите изображение нитей лампы в центричное положение относительно оправы 103 (см. рис. 9) телеобъектива. После этого снимите матовое стекло.
Включите увеличение 1 насадки. Вращением рукояток 85 (см. рис. 8) сфокусируйте микроскоп на объект. Поворотом рукоятки 126 (см. рис. 12) прикройте апертурную диафрагму, а с помощью рукоятки 81 (см. рис. 8) прикройте полевую диафрагму.
Приведите изображение полевой диафрагмы с помощью винтов 82 в центр поля микроскопа и откройте ее так, чтобы изображение ее краев выступало за пределы поля микроскопа. Если изображение полевой диафрагмы меньше поля микроскопа, то введите в ход лучей дополнительную линзу конденсора.
8.5. Работа по методу фазового контраста
Метод фазового контраста предназначается для исследований неокрашенных препаратов и живых объектов, так как при работе по этому методу повышается контрастность изображения.
При работе по методу фазового контраста необходимо применять кольцевую диафрагму 162, фазовые ахроматические объективы 20х, 40х и 90х, апохроматический объектив 70х и зеленый светофильтр.
Настройку освещения осуществляйте так же, как для работы с панкратическим конденсором ПК-3.
После настройки освещения откройте полностью апертурную диафрагму и раскройте полевую диафрагму строго по полю, что способствует предохранению объекта от излишней засветки рассеянным светом. Откройте крышку осветителя и установите в гнездо светофильтр, вверните в револьвер группу фазовых объективов, введите в ход лучей объектив 20х и сфокусируйте микроскоп на объект. Установите с помощью кольца апертуру конденсора по апертуре объектива, включите в ход лучей бинокулярной насадки систему линз с гравировкой «ФК», сфокусируйте систему, наблюдая в окуляр, на фазовое кольцо объектива, вложите в оправу апертурной диафрагмы кольцевую диафрагму; изображение диафрагмы может быть меньше или больше фазового кольца объектива и расположено не центрично по отношению к нему.
Вращая кольцевую диафрагму и перемещая ее, совместите изображение кольцевой диафрагмы с изображением фазового кольца объектива. Вращением кольца с апертурной шкалой конденсора ПК-3 добейтесь такого положения, при котором светлое изображение кольцевой диафрагмы будет перекрываться изображением темного фазового кольца объектива. Нельзя допускать, чтобы изображение кольцевой диафрагмы выступало за изображение фазового кольца, так как это сильно снижает контрастность изображения объекта.
Включите в ход лучей одно из увеличений насадки, проверьте центричность полевой диафрагмы, если нужно, то приведите ее в центр поля микроскопа и откройте строго по полю, после чего приступайте к исследованиям.
Помните, что после смены объектива или препарата необходимо заново проверить центрировку кольцевой диафрагмы, фазового кольца и полевой диафрагмы, так как только после этого будет обеспечена надлежащая контрастность.
8.6. Работа в поляризованном свете
Для исследования объектов в поляризованном свете применяют два поляризационных светофильтра, один из которых выполняет функции поляризатора 163, другой — анализатора 164.
Для работы в поляризованном свете настройку освещения производите так же, как для работы с панкратическим конденсором ПК-3 или с телеобъективом и конденсором КОН-3 в зависимости от применяемых объективов.
После настройки освещения вставьте в оправу апертурной диафрагмы 84 (см. рис. 8) микроскопа или в оправу телеобъектива поляризационный фильтр-поляризатор и вверните в бинокулярную насадку (снизу) поляризационный фильтр-анализатор. Выведите из поля микроскопа изображение объекта и вращением оправы апертурной диафрагмы (или светофильтра в оправе на телеобъективе) скрестите поляризатор и анализатор, т. е. добейтесь более полного гашения. Введите в поле микроскопа изображение объекта. При повороте предметного столика с объектом можно наблюдать анизотропию объекта. Предварительно произведите центрировку столика, т.е. совместите ось вращения столика с визирной осью микроскопа или с центром поля микроскопа, как указано ниже.
Примечание. Прибор не обеспечивает проведения исследований в поляризованных лучах. Введение поляроидов позволяет лишь получать более контрастные изображения некоторых объектов.
8.7. Работа с центрировочной пластиной
Центрировочная пластина служит для быстрого совмещения оси вращения предметного столика 68 с центром поля микроскопа. На ярлыке пластины записаны координаты совмещенного положения перекрестия пластины с осью вращения столика.
Центрировочную пластину установите на столике так, чтобы ярлык пластины расположился около подвижного держателя 108
(см. рис. 10) препаратоводителя. В этом положении отожмите один из винтов 109 и установите неподвижный держатель 107 строго на совмещение с риской. Далее вращением рукояток 105 и 106 установите отсчеты на шкалах по координатам, записанным на ярлыке пластины. Вверните в револьвер объектив малого увеличения, вставьте в бинокулярную насадку окуляры 4х (один с перекрестием) и включите увеличение 1 насадки. Настройте освещение, сфокусируйте микроскоп на перекрестие центрировочной пластины и вращением центрировочных винтов 113 совместите перекрестие пластины с перекрестием окуляра. Отожмите винт 112 и, наблюдая в окуляр, поворачивайте верхнюю часть столика вокруг оси примерно на 180°; заметьте, на какую величину смещается ось вращения столика относительно перекрестия окуляра (ось вращения столика проходит через центр окружности, которую описывает перекрестие центрировочной пластины при вращении столика). В том случае, если ось вращения не будет совпадать с перекрестием окуляра, центрировочными винтами 113 столика совместите ее с перекрестием окуляра, а затем рукоятками 105, 106 совместите перекрестие центрировочной пластины с перекрестием окуляра. Снова поверните столик вокруг оси и снова заметьте смещение оси вращения столика относительно перекрестия окуляра. Повторяя указанные выше действия несколько раз, добейтесь, чтобы смещение оси вращения столика относительно перекрестия окуляра было минимальным.
После того как будет достигнуто совмещение оси вращения столика с перекрестием окуляра, при дальнейшей работе центрировочные винты 113 трогать нельзя; для перемещения препарата нужно пользоваться рукоятками 105 и 106.
В отцентрированном положении столика выньте цептрировочную пластину и установите исследуемый объект в держатели 107 и 108, для просмотра объекта пользуйтесь рукоятками 105 и 106.
Если необходимо зафиксировать положение препарата для его вторичного отыскания, на предметном стекле препарата следует записать его координаты по шкалам препаратоводителя. Такая фиксация координат препарата поможет быстрее повторно ввести в поле микроскопа интересующий участок препарата.
Для этого центрировочную пластину установите на столик и по шкалам столика установите отсчеты согласно координатам, записанным на пластине. Изображение перекрестия пластины совместите винтами 113 с перекрестием окуляра, после чего вместо центрировочной пластины поставьте препарат. По шкалам столика установите координаты, указанные па предметном стекле препарата.
8.8. Работа в отраженном (падающем) свете в светлом и темном поле
При подготовке к работе в светлом поле выдвиньте из основания правую рукоятку 78 (см. рис. 8) для включения в ход лучей зеркала и направления пучка лучей от лампы в осветительную систему отраженного света. Выдвиньте рукоятку 80 для включения в ход лучен отражателя светлого поля, выключите перемещением рукоятки 101 (см. рис. 9) ахроматическую линзу, откроите полностью с помощью рукоятки 99 апертурную диафрагму и рукояткой 90 (см. рис. 8) — полевую диафрагму. Положите матовое стекло на предметный столик при снятом объективе и, перемещая лампу с помощью винтов 75 (см. рис. 7) и коллектор с помощью рукоятки 76, добейтесь резкого изображения нити лампы на матовом стекле и центричного ее расположения относительно отверстия под объектив.
После настройки освещения вверните в револьвер эпиобъективы, установите на предметный столик объект, включите в ход лучей увеличение 1 насадки и вращением рукояток 85, 86 сфокусируйте микроскоп па объект. Затем с помощью винтов 91 отцентрируйте изображение полевой диафрагмы в поле окуляра, откройте полевую диафрагму в соответствии с полем зрения окуляра и, пользуясь рукояткой 99 (см. рис. 9), откройте апертурную диафрагму. Степень раскрытия диафрагмы определите при наблюдении в бинокулярную насадку, в которой при этом должна быть включена оптическая система с гравировкой «ФК».
Для работы в темном поле, вдвинув рукоятку 80 (см. рис. 8) до упора, включите кольцевое зеркало и откройте полностью апертурную и полевую диафрагмы.
8.9. Работа при смешанном освещении объекта
Смешанное освещение, т.e. освещение объекта одновременно проходящим и падающим светом, применяют при исследовании полупрозрачных объектов как в светлом, так и в темпом поле.
При переходе па смешанное освещение включите в ход лучей светоделительную пластинку, для чего выдвиньте рукоятку СМЕШАННЫЙ СВЕТ (слева от исследователя) до отказа. В этом случае приблизительно 50% света направляется в систему для освещения объекта проходящим светом и приблизительно 50% в систему для освещения объекта падающим светом. Настройку каждой из систем производите, как указано выше.
При микроскопе, настроенном для работы в проходящем свете, одновременное освещение объекта падающим светом позволяет получить четкое изображение контура объекта и его внутренней структуры. При микроскопе, настроенном для работы в падающем свете, одновременное освещение объекта проходящим светом хорошо разрешает наружную структуру объекта (становятся видны мелкие ворсинки, выступы, грани). Исследователь сам выбирает способ освещения.
8.10. Работа в свете люминесценции объектов
Исследования объектов в свете люминесценции можно производить в светлом иоле при освещении объектов снизу, через конденсор. и в темном и светлом ноле при освещении объектов сверху, через объектив.
Кроме того, исследование объектов можно производить при смешанном освещении, т.е. при сочетании освещения препаратов сверху светом, возбуждающим люминесценцию препарата, с одновременным освещением снизу но методу темного поля или фазового контраста.
8.10.1. Настройка микроскопа для исследования объектов в свете люминесценции
при освещении их снизу, через конденсор
При настройке микроскопа отожмите винт 77, снимите осветитель с лампой накаливания, установите на его место кювету 62 (см. рис. 13), наполненную дистиллированной водой или 4-процентным раствором медного купороса, поставьте на направляющие угольника осветитель с ртутной лампой ДРШ250-3, предварительно надев защитную втулку 63, и закрепите его с помощью тормозного устройства 131.
Установите на место апертурной диафрагмы телеобъектив в оправе 103 (см. рис. 12), наденьте на направляющие для конденсоров кронштейн с конденсором КОН-3. Пользуясь описанием блока, зажгите ртутную лампу.
Вверните в револьвер микроскопа объективы с награвированной буквой «Л» для исследований в свете люминесценции объектов (см. табл. 4). Перемещением рукоятки 101 (см. рис. 9) на себя включите ахроматическую линзу. Рукоятки смешанного и отраженного света и рукоятка 80 (см. рис. 8) должны быть вдвинуты до упора.
Поднимите конденсор до упора. На оправу телеобъектива положите матовое стекло и с помощью рукояток 134 (см. рис. 13) и 135 добейтесь центричного положения изображения тела лампы относительно телеобъектива. Рукоятка 137 коллектора при этом должна быть в среднем положении.
Уберите матовое стекло. Светофильтры для возбуждения люминесценции установите на оправу телеобъектива.
Выберите запирающий светофильтр и включите его в ход лучей поворотом диска 102 (см. рис. 9).
Включите в ход лучей объектив 10x0,40, закрепите на предметном столике исследуемый объект. В насадку вставьте окуляры 4х, причем в левую трубку — окуляр с перекрестием. Механизм диоптрийной подвижки окулярной трубки насадки установите на «0» и, наблюдая в окуляр правой трубки, сфокусируйте микроскоп на объект. Не трогая рукояток микрометрического механизма, перемещением глазной линзы окуляра (в левой трубке насадки) добейтесь резкого изображения объекта.
В случае недостаточной освещенности объекта включите в ход лучей призму 34 (см. рис. 1), для чего рукоятку 96 (см. рис. 8) выдвиньте из корпуса головки до отказа. Откройте полностью апертурную диафрагму.
Включите увеличение 1 насадки. Поворотом рукоятки 81 закройте полевую диафрагму. Ненамного прикройте апертурную диафрагму конденсора. Перемещением конденсора по высоте добейтесь такого положения, при котором в поле микроскопа будет резко видна полевая диафрагма. Вращением винтов 82 приведите изображение полевой диафрагмы в центр ноля окуляра, после чего раскроите полевую диафрагму до размеров поля окуляра, а апертурную примерно на 2/3 диаметра выходного зрачка объектива.
Перемещением коллектора с помощью рукоятки 137 (см. рис. 13) добейтесь наилучшей освещенности в плоскости объекта.
Переход от работы с объективом малого увеличения к работе с объективом большего увеличения и с иммерсионными объективами осуществляйте с соблюдением всех указании подраздела 8.2 настоящего описания.
При перерывах в работе рекомендуется с помощью рукоятки 138 включать в ход лучей предохранительную шторку, которая защищает объекты от вредного действия светового потока.
ВНИМАНИЕ!
Снимать кювету с прибора при включенной лампе ДРШ250-3 или незакрытой шторке нельзя.
8.10.2. Настройка микроскопа для исследований в свете люминесценции объектов
при освещении их сверху, через объектив, в светлом и темном поле.
Освещение объектов сверху, через объектив, имеет значительные преимущества перед освещением снизу, через конденсор, так как изображение объекта становится значительно ярче. Освещение сверху применяется при работе с сильными объективами с большой апертурой (0,65—1,25), а также при исследовании толстых прозрачных и непрозрачных объектов.
При настройке микроскопа для работы в светлом поле вверните в револьвер объективы, рассчитанные па длину тубуса 160 мм, или эпиобъективы, рассчитанные па длину тубуса 190 мм. Вставьте в бинокулярную насадку, установленную на головку микроскопа, окуляр 4х. Установите в гнездо 88 (см. рис. 8) тубусодержателя необходимые светофильтры возбуждения в зависимости от характеристик объектов и применяемых флюорохромов.
Выберите и введите в ход лучей один из «запирающих» светофильтров; введите в ход лучей светоделительную пластинку, для чего рукоятку 80 установите в положение «Л», выдвинув ее до упора. Выдвиньте до упора рукоятку 78 для включения зеркала, направляющего свет в систему отраженного света. Пользуясь техническим описанием и инструкцией по эксплуатации блока питания лампы ДРШ250-3, зажгите лампу.
Поворотом револьвера введите в ход лучей отверстие револьвера без объектива, положите матовое стекло или лист бумаги на предметный столик, па котором должно быть видно изображение источника света. Перемещением коллектора с помощью рукоятки 137 (см. рис. 13) и центрировкой лампы с помощью рукояток 134 и 135 добейтесь резкого и наиболее центричного расположения изображения яркой части светящегося тела лампы относительно отверстия под объектив. Включите в ход лучей объектив малого увеличения, поместите на предметный столик исследуемый объект и сфокусируйте на него микроскоп. При установке больших объектов снимите апертурную диафрагму для проходящего света и конденсор и опустите предметный столик на столько, на сколько это требуется по условиям фокусировки. После этого с помощью рукоятки 90 (см. рис. 8) прикройте полевую диафрагму, с помощью рукоятки 99 (см. рис. 9) —апертурную диафрагму и вращением винтов 91 (см. рис. 8) приведите изображение полевой диафрагмы в центр поля окуляра, после чего откройте полевую диафрагму по размерам поля окуляра.
При работе с эпиобъективами 21х0,40Л и 40х0,65Л апертурную диафрагму открывают полностью, при работе с объективами, рассчитанными на тубус 160 мм,—по размерам выходного зрачка объектива.
После настройки освещения включите выбранное увеличение насадки и приступите к исследованиям в светлом поле.
Во время работы добейтесь наилучшей освещенности объекта перемещением коллектора с помощью рукоятки 137 (см. рис. 13).
При перерывах в работе вращением рукоятки 138 включите защитную шторку для предохранения объекта от излишней засветки.
Для перехода к работе в темном поле выведите из хода лучей светоделительную пластинку и включите кольцевое зеркало, для чего рукоятку 80 (см. рис. 8) вдвиньте до упора, полностью откройте полевую и апертурную диафрагмы.
8.10.3. Настройка микроскопа для исследований объектов при смешанном освещении
Для одновременного освещения объектов проходящим и отраженным светом включите в ход лучей светоделительную пластинку, расположенную слева в основании микроскопа, для чего выдвиньте до отказа рукоятку СМЕШАННЫЙ СВЕТ. На пластинке 26 (см. рис. 1) имеется интерференционное покрытие, отражающее сине-фиолетовые лучи в систему отраженного света и пропускающее желто-зеленые лучи в систему проходящего света.
Исследователь сам выбирает способ освещения в зависимости от характеристик объекта.
При одновременном наблюдении изображения объекта в свете люминесценции и по методу фазового контраста применяют любой светофильтр из комплекта микроскопа (СС15, ОСП, КС 11, НС10, НСЗ или ЗС11), причем светофильтр выбирают так, чтобы его цвет не совпадал с цветом люминесценции. Светофильтр устанавливают под конденсор.
При смешанном освещении объекта можно падающим светом сверху возбуждать люминесценцию объекта, а снизу проходящим светом подсвечивать объект по методу фазового контраста или темного поля, используя соответственно конденсор ПК-3 или ОИ-13. Настройку освещения в этом случае осуществляют, как указано в подразделах 8.4 и 8.5 настоящего описания.
8.11. Фотографирование
Фотографирование изучаемых под микроскопом объектов может производиться при всех методах микроскопирования.
Для того чтобы направить световой поток в плоскость пленки (или пластинки), включите в ход лучей светоделительную призму, вдвиньте рукоятку 96 (см. рис. 8) до упора. Настройте освещение в зависимости от выбранного метода микроскопирования. Совместите ось вращения предметного столика с оптической осью микроскопа, как указано в подразделе 8.7 настоящего описания. Это необходимо для того, чтобы при повороте столика объект не выходил из поля микроскопа и кадра фотокамеры. Приведите в центр поля тот участок объекта, который предполагается фотографировать.
Снимите с корпуса тубусодержателя крышку и установите одну из прилагаемых фотокамер.
Откройте крышку 165 (рис. 8), вставьте в держатель фотоокуляр, соответствующий выбранному объективу (см. табл. 2, 3, 4 настоящего описания).
Положение
рукоятки
| Светочувствительность пленки, ед. ГОСТ
| 11оложение рукоятки
| Светочувствительность пленки, ед. ГОСТ
| 0
| _____
| 5
| 16—22
| 1
| 1 — 1,4
| 6
| 32—45
| 2
| 2—2,8
| 7
| 65-90
| 3
| 4-4,5
| 8
| 130—180
| 4
| 8-11
|
|
|
Пленочную фотокамеру 12 установите на микроскоп с помощью переходной втулки 166 со штырьком и закрепите винтом 167. Втулка 166 фиксируется на микроскопе винтом 168. Устанавливая камеру на микроскоп, проследите за тем, чтобы штырек переходной втулки 166 попал в отверстие 169 (рис.17), при этом открывается светозащитная шторка 110.
Прежде чем установить фотокамеру на микроскоп, зарядите ее пленкой. Зарядка пленки показана на рис. 18. Для того чтобы откинуть заднюю крышку 171, оттяните замок 172. Вращайте большим пальцем правой руки приемную катушку до тех пор, пока не появится щель. Вставьте кассету с пленкой в гнездо как показано на рис. 18.
Вставьте в щель приемной катушки конец пленки так, чтобы она надежно там закрепилась. Зубья зубчатого барабана должны входить в перфорационные отверстия пленки. Для натяжения пленки рекомендуется повернуть вручную барабан приемной катушки. Закройте заднюю крышку 171.
Вращая диск шкалы-памятки 173 (рис. 19), установите соответствующее значение светочувствительности пленки, чтобы не забыть, какая пленка заряжена в камеру. Вращением головки 174 счетчика кадров 175 установите его на первую красную точку (считая от «О») между точками «О» и «35». Кадры от точки «О» до точки «35» являются нерабочими. Съемку объекта начните с момента, когда индекс счетчика кадров совмещен с числом «35».
В фотокамере обеспечена обратная перемотка пленки. Для того чтобы перемотать пленку, нажмите кнопку 176 и, откинув рукоятку 177 (см. рис. 18), поворачивайте ее в направлении стрелки до тех пор, пока она не начнет свободно вращаться. Когда пленка перемотана, выньте кассету из фотокамеры. Следует иметь в виду, что при включении и выключении пульта управления фотосъемкой тумблером СЕТЬ возможна самопроизвольная перемотка пленки в фотокамере на 1 кадр без нажатия кнопки СЪЕМКА.
При фотографировании пленочной камерой наблюдение за изображением объекта ведите в бинокулярную насадку, используя измерительный окуляр 15 или 16х. Для наводки на резкость изображения и выбора фотографируемого участка препарата
шкалу с перекрестием в окуляре замените специальной сеткой (рис. 20). На сетке нанесены четыре прямоугольника, увеличение фотоокуляров и биштрихи. Размеры прямоугольников соответствуют размеру кадра фотоаппарата при указанном увеличении фотоокуляра.
Для смены сетки измерительного окуляра отвинтите коллективную линзу, снимите пластинку с перекрестием и шкалой и на ее место установите сетку с прямоугольниками так, чтобы гравировка была с наружной стороны. Затем вверните коллективную линзу с сеткой в окуляр. Окуляр вставьте в окулярную трубку бинокулярной насадки, не имеющую диоптрийной подвижки. После этого исключите ошибку глаза, перемещая глазную линзу окуляра до тех пор, пока сетка с прямоугольниками и биштрихи не будут резко видны. Затем сфокусируйте микроскоп на объект. Изображения объекта и сетки окуляра должны быть видны одинаково резко, при этом окуляр должен быть повернут так, чтобы большие стороны прямоугольников были расположены горизонтально. Только при такой последовательности фокусировки обеспечивается одновременно резкое изображение как на фотопленке, так и в визуальном тубусе бинокулярной насадки. При фотографировании на пленку наблюдение за объектом ведите одним глазом. После того как будет достигнуто резкое изображение объекта в визуальном тубусе, при необходимости установите в осветительную систему светофильтр и подправьте фокусировку на объект.
Установите переключатель 151 (см. рис. 15) пульта в положение, соответствующее светочувствительности применяемой пленки в соответствии с табл. 7.
Включите тумблер СЕТЬ на передней панели пульта управления фотосъемкой, при этом должна загореться сигнальная лампа 148.
Таблица 7
Положение
рукоятки
| Светочувст-
вительность
пленки,
ед. ГОСТ
| Положение рукоятки
| Светочувст-
вительность
пленки,
ед. ГОСТ
| 0
| ___
| 5
| 16—22
| 1
| 1 — 1,4
| 6
| 32—45
| 2
| 2—2,8
| 7
| 65-90
| 3
| 4-4,5
| 8
| 130—180
| 4
| 8-11
|
|
|
Прогрейте пульт в течение 5—7 минут. Затем выдвиньте рукоятку 98 (см. рис. 8), предохраняющую фотокатод фотоэлектронного умножителя от засветки, и приступите к фотографированию.
Фотографирование производить нажатием кнопки СЪЕМКА, при этом загорается сигнальная лампа 149 (см. рис. 15), которая горит до тех пор, пока открыт затвор. По окончании экспонирования происходит перемотка пленки на один кадр, после чего можно приступать к съемке следующего кадра.
В случае, если световой поток, попадающий на фотокатод фотоэлектронного умножителя, слишком велик, загорается сигнальная лампа 150. Тогда уменьшите световой поток и нажмите кнопку УМЕНЬШИТЬ ОСВЕЩЕННОСТЬ ОБЪЕКТА. Если после этого световой поток не превысит допускаемого значения, лампа 150 гаснет.
Конструкция затвора пе рассчитана на отработку выдержек короче 1/25 секунды. Схема блокировки, включающая сигнал «Уменьшить освещенность объекта», предназначена для предохранения фотоэлектронного умножителя и не связана со светочувствительностью применяемой фотопленки, поэтому при работе с пленками высокой светочувствительности для получения нормально экспонированного негатива рекомендуется уменьшать световые потоки, чтобы затвор работал с выдержками не короче 1/25 с. Для этого при фотографировании введите в ход лучей осветительной системы нейтральный светофильтр или уменьшите напряжение, подаваемое на лампу.
Рукоятка 154 (см. рис. 16) имеет два положения: нижнее и верхнее. В верхнем положении 1 рукоятки микроамперметр 152 (см. рис. 15) показывает напряжение на фотоэлектронном умножителе, в нижнем рабочем положении 2—изменение входного тока экспонометрического устройства (за время экспонирования ток должен меняться приблизительно от 60 до 15мкА). Равномерное уменьшение тока при выдержках от 1 секунды и более свидетельствует о нормальной работе электронных блоков.
Фотокатод фотоэлектронного умножителя нельзя подвергать долгой засветке, поэтому при просмотровых и поисковых работах он должен быть закрыт шторкой, для чего рукоятку 98 (см. рис. 8) вдвиньте до упора.
Для обеспечения получения нормально экспонированных фотоматериалов для каждого экземпляра фотоэлектронного умножителя выбирается определенное напряжение.
Выбор оптимального напряжения, подаваемого па фотоэлектронный умножитель (т. е. градуировка экспонометрического устройства при выпуске микроскопа), производится при использовании пленки типа КН средней светочувствительности (например, от 32 до 65ед. ГОСТ). Рекомендуется при получении микроскопе! проверить правильность установленного напряжения путем фотографирования объекта на указанную пленку, а при замене фотоэлектронного умножителя (в случае выхода его из строя) выбрать необходимое для него напряжение.
Для замены фотоэлектронного умножителя снимите крышку кожуха 97, отверните находящуюся под ней гайку с накаткой, выньте плату, осторожно снимите фотоэлектронный умножитель и поставьте новый.
Регулировку и выбор правильного напряжения производите следующим образом: настройте микроскоп, зарядите фотопленку в фотокамеру, на пульте управления поставьте переключатель 151 (см. рис. 15) в положение, соответствующее светочувствительности применяемой фотопленки; рукоятку 154 (см. рис. 16) установите в верхнее положение. Снимите крышку, закрывающую потенциометр 153 регулировки напряжения на фотоэлектропном умножителе, отвернув винты на крышке. Далее произведите ряд пробных снимков, изменяя напряжение путем вращения потенциометра с помощью отвертки от минимального значения напряжения до максимального через 1 деление шкалы микроамперметра. Зафиксируйте показания микроамперметра, соответствующие каждому снимку.
После проявления фотопленки выберите негатив нормального почернения и установите соответствующее ему значение тока по микроамперметру.
Для пленок, имеющих спектральную чувствительность, существенно отличную от пленок типа КН (например, для пленок типа ЗТ), а также при работе с различными светофильтрами необходимо вводить экспозиционную поправку, которую требуется вводить также в зависимости от интенсивности окраски и структуры исследуемого объекта, если градуировка производилась с другим объектом.
Эта поправка может быть введена различным образом в зависимости от условий работы.
Если, в основном, предполагается производить микрофотографирование па пленку типа ЗТ, то можно выбрать другое оптимальное напряжение, подаваемое на фотоэлектронный умножитель, проградуировав эксионометрическое устройство, как указано выше.
В том случае, если при градуировке при всех напряжениях, подаваемых на фотоэлектронный умножитель, получается недо- экспонирование пленки, перед фотокатодом фотоэлектронного умножителя следует включить нейтральный светофильтр НС 10, для чего рукоятку 100 (см. рис. 9) вдвиньте в корпус микроскопа до упора.
Если используются пленки различного типа, в том числе и такие, спектральная чувствительность которых отличается от чув ствительностн пленок типа КН, то, не меняя градуировки прибора, выберите положение переключателя 151 (см. рис. 15) пульта, для чего настройте микроскоп и произведите фотографирование препарата на выбранную пленку при всех положениях (с 1 по 8) переключателя 151, проявите пленку и определите, при каком положении переключателя получены нормально экспонированные кадры.
Линейные увеличения на фотопленке и фотопластинке подсчитываются по формуле
Г= 1,2 -Роб-Рнас -рф/ок, (1)
где 1,2 — увеличение тубусной линзы при работе с объективами, рассчитанными на длину тубуса 160 мм; роб — увеличение применяемого объектива; рнас- — увеличение оптической системы насадки;
Рф/ок — увеличение применяемого фотоокуляра.
При фотографировании па фотопленку фотоокуляр 7х дает увеличение 4,2, фотоокуляр 10х 5,6, фотоокуляр 16х — 8,6.
При фотографировании на пластинку фотоокуляры работают с номинальным увеличением.
Пластиночную фотокамеру установите на корпус тубусодер- жателя вместо переходной втулки 166 (см. рис. 8) и закрепите винтом 168. Установите тросик и откройте затвор. Настройте микроскоп, открыв крышку 165, вставьте в держатель нужный фотоокуляр.
Прп фотографировании с пластиночной фотокамерой наблюдение за резкостью изображения объекта ведите по матовому стеклу, установленному в гнездо для кассет. Для более точной наводки на резкость изображения применяют прозрачное стекло с перекрестием и лупу 8х.
После того как будет достигнуто резкое изображение объекта на матовом (или прозрачном) стекле, снимите стекло, уберите тросик, закройте затвор, установите на место матового стекла кассету с пластинкой. Включите на пульте (см. рис. 15) тумблер СЕТЬ.
Для получения пластинок с нормальным почернением определите положение переключателя 151. Для этого, пользуясь переходным коэффициентом, приведите значение чувствительности фотопластинки к чувствительности фотопленки (если спектральная чувствительность пластинок существенно не отличается от спектральной чувствительности пленок типа КН) по формуле
где S1 — чувствительность пленки;
S2 — чувствительность пластинки;
К — переходной коэффициент, зависящий от увеличения фотоокуляра; для фотоокуляров 7х и 6,3х К = 3,0; для фотоокуляра 10х К = 3,2; для фотоокуляра 16х /( = 3,5.
Пользуясь табл. 7, установите переключатель 151 в положение, соответствующее полученной чувствительности пленки.
В том случае, если спектральная чувствительность фотопластинок существенно отличается от спектральной чувствительности пленок типа КН, произведите градуировку, как указано выше для пленки, т. е., меняя напряжение на фотоэлектронном умножителе, сделайте несколько пробных снимков на пластинке с малой фотографической широтой (например, пластинки для научных целей, спектральные II и III S = 4,9 ед. ГОСТ) и таким образом определите положение переключателя 151.
8.6. Фотографирование с импульсной лампой
При фотографировании живых объектов, а также объектов, длительная засветка которых нежелательна, рекомендуется пользоваться импульсным источником света.
Помните, что при длительних перерывах в работе с блоком импульсной лампы ИСК-25 необходимо не реже 1 раза в 6 месяцев в течение 8 часов тренировать конденсаторы включением блока питания в сеть. При этом переключатель РЕЖИМ РАБОТЫ на лицевой панели должен быть установлен в положение «1».
Настройку освещения производите с одним из осветителей с лампой ОП12-ЮО при минимальном напряжении или с лампой ДРШ250-3 с нейтральными светофильтрами; при работе рукоятка 79 (см. рис. 8) должна быть выдвинута из основания микроскопа.
Когда нужный участок объекта приведен в центр поля зрения, проверьте, чтобы шторка, предохраняющая фотокатод фотоэлектронного умножителя от засветки, была закрыта. Если шторка не будет закрыта, импульсная лампа не будет работать.
Пр имерно за час до работы включите тумблер СЕТЬ на блоке импульсной лампы. При этом переключатель РЕЖИМ РАБОТЫ установите в положение «1». Переключатель 151 (см.рис. 15) на пульте управления фотосъемкой установите в крайнее левое положение («О»).
Когда все тумблеры включены, нужно установить режим съемки.
Блок питания импульсной лампы ИСК-25 обеспечивает три режима работы. Первый режим предназначен для формовки конденсаторов (перед съемкой), второй и третий режимы — для съемки объектов.
9. ПРАВИЛА ОБРАЩЕНИЯ С МИКРОСКОПОМ,
ХРАНЕНИЕ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ,
ВОЗМОЖНЫЕ НЕИСПРАВНОСТИ МИКРОСКОПА И СПОСОБЫ ИХ УСТРАНЕНИЯ
9.1. Правила обращения с микроскопом
Микроскоп требует бережного и аккуратного обращения.
Микроскоп выпускается тщательно проверенным и может безотказно работать продолжительное время, но для этого необходимо содержать его в чистоте и предохранять от повреждении. Упаковка обеспечивает сохранность микроскопа при перевозке. При получении микроскопа проверьте сохранность пломбы.
Особое внимание обращайте на чистоту оптических деталей микроскопа. Пыль с оптических поверхностен смахивайте беличьей кисточкой. Жировые налеты удаляйте мягкой тряпочкой, слегка смоченной чистым бензином или ксилолом, или ватой, намотанной на гладкую деревянную палочку и также смоченной бензином или ксилолом. Особенно аккуратно чистите зеркальные поверхности; пыль с них сдувайте резиновой грушей.
Кювету наполняйте только дистиллированной водой или 4-процентным раствором медного купороса, так как в противном случае на ее стенках могут образоваться налеты, которые будут ослаблять световой поток, проходящий через воду.
Не разбирайте узлы микроскопа для чистки оптики сами, так как такая разборка приведет к разъюстировке и порче микроскопа.
Смазку направляющих микроскопа производите по мере загустения заводской смазки, что станет сказываться на легкости и плавности хода подвижных частей микроскопа. В этом случае смойте загустевшую смазку бензином и нанесите на направляющие тонкий слой вазелина или смазки из комплекта микроскопа.
| 
