Микробиологическое исследование крови производят при заболеваниях, связанных с проникновением микроорганизмов в ток крови. В норме кровь человека стерильна. В ток крови микробы попадают в результате осложнения при ряде заболеваний, при переливании крови и раз личных манипуляциях, когда развиваются сепсис, бактериемия, бактериальный шок. Исследование крови на содержание микроорганизмов следует проводить у больных с длительной неясной лихорадкой, особенно у людей с пониженной иммунологической реактивностью.
Этиология.
Септицемия и бактериемия могут быть вызваны практически всеми микроорганизмами -патогенными и условно патогенными. Среди грамположительных бактерий наиболее частыми возбудителями сепсиса являются Staph. aureus. Streptococcus группы D, Str. viridans, Str. pneumoniae. Среди грамотрицательных преобладают Е. coli, Klebs. pneumoniae, Ps. aeruginosa, Bacteroides fragilis. Из грибов чаще других встречается Candida albicans.
Взятие крови для исследования.
Кровь для посева следует брать до начала антибактериальной терапии или через определенный промежуток времени (8-10 ч) после введения лекарственного препарата, необходимый для его выведения из организма. Если посев крови производят во время антибактериальной терапии, рекомендуется добавлять в питательные среды вещества, нейтрализующие действие лекарственных препаратов. Так, при пенициллинотерапии с этой целью можно использовать пенициллиназу, при применении цефалоспоринов --- цефалоспориназу, тетрациклинов ---ионы магния, являющиеся антагонистами тетрациклина.
Кровь от больного для посева следует брать в начале озноба при подъеме температуры.
Кровь для посева берут из вены, строго соблюдая правила асептики. Для этого кожу на месте венопункции тщательно обрабатывают спиртом и йодом повторно. Шприцем, стерильным, набирают 10-15 мл крови (2-3 мл у маленьких детей), которую либо не посредственно у постели больного засевают в питательную среду, либо помещают в стерильную посуду, содержащую вещества, препятствующие свертыванию крови (0,3 % раствор цитрата натрия, 0,1 % оксалата натрия, 1 мл гепарина и др.). Материал быстро транспортируют в лабораторию, где производят дальнейшее исследование. Хранить кровь в холодильнике можно не более 1-2 ч, при более длительном хранении возможен лизис бактерий.
Проведение исследования.
Производят посев 5-10 мл крови на 50-100 мл жидкой питательной среды -1 % сахарный бульон, «двухфазную» среду, а также жидкие и полужидкие среды для культивирования анаэробов . При подозрении на брюшной тиф или другие инфекции применяют специальные питательные среды [Биргер М. И., 1982]. Для количественного определения массивности обсеменения крови делают посев нескольких капель крови из шприца на поверхность чашки Петри с 5 % кровяным агаром. Посевы инкубируют в термостате в течение 10 дней. Просмотр посевов производят ежедневно. При наличии роста на питательных средах делают высевы на чашки с 5 % кровяным агаром, которые инкубируют в аэробных и анаэробных условиях. Из колоний, выросших на чашках с кровяным агаром, выделяют чистую культуру, идентифицируют ее и определяют чувствительность к антибиотикам. Посевы крови на «двухфазной» среде просматривают, наклоняя флакон и таким образом увлажняя поверхность скошенного агара бульоном с кровью. При этом исключается необходимость в высевах на плотные среды и снижается возможность загрязнения посевов. Во избежание высыхания питательных сред пробки флакона парафинируют. В таком виде флаконы можно выдерживать в течение месяца, что бывает необходимо при выделении медленно растущих микроорганизмов.
Однократный посев крови не всегда приводит к выделению гемокультуры. Более информативным является трехкратный посев крови с интервалами между посевами в сутки. У леченых больных кровь для посева следует брать 5-6 раз.
Оценка результатов микробиологического исследования крови зависит от вида выделенных микроорганизмов и массивности роста. Выделение патогенных видов с несомненностью свидетельствует об их этиологической роли в заболевании. В том случае, когда из крови выделены УПМ, следует учитывать их количественное содержание (выделение единичных клеток чаще свидетельствует о контаминации), наличие монокультуры или ассоциации (ассоциации чаще выделяются при загрязнении посева, однако у больных со сниженной иммунологи ческой реактивностью возможна смешанная инфекция), повторность выделения одной и той же
культуры от больного и идентичность гемокультуры с культурами, выделенными из другого материала от этого же больного.
При окончательном заключении микробиолог должен сопоставить данные микробиологического исследования с клиникой заболевания и результатами других анализов.
Если через 10 дней после посева крови роста микробов на питательных средах не обнаружено, анализ можно считать отрицательным.
Среды для культивирования анаэробов.
1. Плотная питательная среда
типа КАБ: 1 г. твин 80, 2 г Na2HPO4, 1 г растворимого крахмала, 1 г гидрокарбоната натрия растворяют при подогревании в 60 мл дрожжевого аутолизата. Раствор фильтруют, добавляют к 940 мл растопленного мясо пептонного агара, хорошо перемешивают и автоклавируют в течение 20 мин при 0,5 атм. После фильтрации при бавляют 250 мг 1 цистеина гидрохлорида, 0,4 мл тиогликолевой кислоты и 6 г глюкозы; устанавливают рН 7,0---7,2, разливают в пробирки по 10 мл, стерилизуют при 0,5 атм 20 мин. Эту основу хранят в условиях холодильника. Перед использованием среду регенерируют 20 мин в кипящей водяной бане, быстро охлаждают до 50 °С, прибавляют 0,1 мл раствора гемина (50 мг гемина растворяют в 1 мл 1 н. NaOH, добавляют 100 мл дистиллированной воды, автоклавируют при 1 атм 15 мин); 1 мл лизированной двукратным замораживанием и оттаиванием цитратной крови донора перемешивают, выливают в чашку Петри, после застывания подсушивают 10-15 мин. Используют для посева или помещают для хранения в анаэробные условия при комнат ной температуре. Для придания среде селективных свойств перед разливом в чашки прибавляют один из следующих антибиотиков: 75 мкг/мл неомицина или канамицина, 50 мкг/мл гентамицина, 40 мкг/мл налидиксовой кислоты (невиграмон, неграм).
2. Жидкая питательная среда.
Ее основной состав и способ приготовления те же, что и для плотной среды. Однако вместо мясо пептонного агара используют мясо пептонный бульон (содержание агар агара в среде 0,6 г/л). Приготовленную основу разливают по 100-150 мл во флаконы и стерилизуют при 0,5 атм 20 мин, хранят в холодильнике. Перед использованием среду регенерируют 20 мин на кипящей водяной бане, быстро охлаждают до 50 °С, прибавляют 1 мл раствора гемина (на 100 мл среды), 10--- 15 % по объему стерильной сыворотки крупного рогатого скота (можно использовать лошади ную сыворотку, стерильную асцитическую жидкость), разливают по 5 мл в пробирки и хранят в анаэробных условиях при комнатной температуре, выдержав предварительно микроанаэростаты со средой при 37 °С в течение 2 сут для контроля стерильности среды. Используется так же стандартная «Питательная среда для контроля стерильности сухая», к которой добавляют растворимый крахмал, твин 80, гемин в количествах и способом, как указано выше. Готовые к употреблению среды хранят также в анаэробных условиях.
3. Желточная анаэробная среда.
К 500 мл регенерированной плотной среды для анаэробов (основа), охлажденной до 60 °С, с соблюдением правил асептики прибавляют желток одного яйца (поверхность должна быть деконтаминирована погружением яйца на 1 ч в 96 % спирт; яйцо не должно содержать антибиотиков), перемешивают, разливают в чашки Петри. После застывания подсушивают, хранят в анаэробных условиях.
|
