Гистохимические методы для полисахаридов и протеидов

Комбинированные гистохимические методы

(для полисахаридов и протеидов)

Преимущество методов — выявление на одном срезе двух различных химических компонентов белковой и полисахаридной природы.

Комбинированный метод выявления полисахаридов (по Риттеру — Олессону)

(фиксаторы формалин, 10% формалин в 90% спирте; заливка в парафин)

Представляет собой сочетание двух методов — ШИК-реакции и метода Гале, что дает возможность выявлять в одном и том же срезе кислые мукополисахариды и мукопротеиды.

Метод.

1. Срезы депарафинировать и довести до воды.

2. Обработать по методу Гале и перед докраской ядер провести ШИК-реакцию, а затем хорошо промыть в дистил­лированной воде.

3. Обезводить, просветлить, заключить в бальзам.

Результат.

Кислые мукополисахариды окрашены в синий цвет, мукопротеиды —в пурпурно-красный.

Комбинированный метод выявления белков  и нейтральных полисахаридов

(фиксаторы — Карнуа, 10% формалин)

Применение данного метода обеспечивает одновре­менное выявление в срезах белка и нейтральных полисахари­дов и удачно отражает структурную и химическую организа­цию исследуемых микроструктур.

Сущность метода состоит в том, что краситель процион связывается с некоторыми аминокислотными остатками белка, а ШИК-реакция окрашивает нейтральные полисаха­риды.

Рабочие растворы

1. Реактив Шиффа

2. Сернистая вода

3. Раствор перйодата: 250 мг перйодата калия растворить в 100 мл теплой дистиллированной воды.

4. Раствор проциона голубого (по В. Б. Иванову): 100 мг фосфатного буфера рН 5,6.

Метод окрашивания (парафиновые срезы)

1. Довести срезы до воды.

2. Поместить на 10 мин в перйодат калия.

3. Промыть в двух порциях дистиллированной воды.

4. Поместить в реактив Шиффа на 20 мин.

5. Промыть в трех порциях сернистых вод по 3 мин в каждой.

6. Промыть в проточной воде в течение 30 мин.

7. Ополоснуть в дистиллированной воде и перенести в 0,1% раствор проциона на 40 мин при температуре 50°С.

8. Ополоснуть в двух порциях дистиллированной воды.

9. Обезводить, просветлить, заключить в бальзам.

Результат.

Структуры, содержащие белок, ок­рашиваются в ярко-синий, а углеводы — в ярко-красный цвет.