Липиды: методы цитохимического определения.

Локализуются в цитоплазме клеток главным образом в мембранах органелл и обнаруживаются преимущественно в нейтрофильных гранулоцитах. Играют важную роль в проницаемости мембран. Цитохимическое исследование основано на применении красящих веществ, растворяющихся в жирах (судан III, судан IV, черный судан и др.). Для выявления нейтрального жира пользуются суданом III, окрашивающим жир в оранжевый цвет. Липоиды выявляются лучше суданом черным (черное окрашивание).


Окраска суданом III (метод Гольдмана).


Принцип.

Растворение жиров и окраска суданом III в оранжевый цвет.


Реактивы.

1.Формалиновый спирт (1 часть формалина и 4 части 96 % спирта).

2. 70 % этиловый спирт (к 100 мл 96 % спирта прибавить 39,18 мл дистиллированной воды).

3. aльфа-Нафтол.

4. Раствор судана (к 100 мл 70 % спирта добавляют 20 мл дистиллированной  воды, 1,2 г альфа-нафтола и в избытке судан III. Раствор кипятят в течение 10 мин и фильтруют).

5. Краситель Романовского .


Специальное оборудование.

Не требуется.


Ход определения.

Мазки крови фиксируют в формалиновом спирте в течение 1— З мин. 

Красят в растворе судана III в течение 10 мин.

Помёщают в 70 % этиловый спирт на 1 мин.

Докрашивают красителем Романовского —  или гематоксилином в течение 5— 10 мин.

Промывают дистиллированной водой.

Липиды выявляются в виде оранжевых зерен.


Нормальные величины.

В мазках периферической крови липиды содержатся в цитоплазме нейтрофилов в виде обильной зернистости. Большинство нейтрофилов (69—80 %) у здоровых людей красятся интенсивно (+ + +) 18—36 % дают окраску средней интенсивности (++) и 10% слабо окрашены (+).

СЦК липидов в нейтрофилах 2,650,033. В мазках костного мозга в миелобластах обнаружено небольшое содержание липидов, в промиелоцитах их больше и по мере созревания нейтрофилов содержание липидов увеличивается.


Клиническое значение.

Повышение содержания липидов в нейтрофилах наблюдается при острых лейкозах и обострении хронических лейкозах. При острых лейкозах, липиды в бластных клетках обнаружены у больных при миелобластном и монобластном вариантах и не выявлены при лимфобластном остром лейкозе. При недифференцированном остром лейкозе бластные клетки лишь в небольшом количестве (2,20,82 %) содержат липиды. Уменьшение липидов в нейтрофилах выявлено при ревматизме, воспалительных процессах.




Яндекс.Метрика